domingo, 25 de noviembre de 2018

ADN RECOMBINANTE



El ADN se recombina de forma natural mediante diversos procesos como reproducción sexual, transformación bacteriana e infección viral. En el caso de la hequilobacter pylori la tranformación le garantiza captar ADN libre que puede ser parte del cromosoma de otra bacteria e incluso de otra infección bacteriana; tambien hay transformación cuando captura diminutas moléculas de ADN  plasmídico el mismo que le otorga a la bacteria vivir en ecosistemas nuevos; los ejemplos mas claros son las bacterias poseedoras de plasmidos resistentes a los antibióticos.



VACUNA QUE INDUCE INMUNOGENICIDAD Y PROTECCIÓN CONTRA PCP



Se ha realizado una Vacuna peptídica KEX1 recombinante en un modelo de primate.
La inmunización con KEX1 indujo una fuerte respuesta humoral  que permaneció en niveles protectores a pesar del virus de la inmunodeficiencia simia crónica / inmunosupresión inducida por VIH. Los macacos inmunizados con KEX1 se protegieron de la neumonía por Pneumocystis, en comparación con los animales inmunizados de manera simulada, después de la inmunosupresión y la posterior exposición natural en el aire a Pneumocystis.
Estos datos respaldan el concepto de que la estimulación de la memoria inmunológica preexistente a Pneumocystis con una vacuna KEX1 recombinante antes de la inmunosupresión induce respuestas de memoria duraderas y protección en el contexto de una inmunosupresión crónica y compleja 

Tomado de: 

domingo, 18 de noviembre de 2018

WESTERN BLOT








El análisis Western de complejos unidos a GlcNAc de Pc confirma la reactividad de GlcNAc en extractos de Pneumocystis . 1) Las preparaciones de pared celular de Pc se separaron por PAGE, y se analizaron las proteínas Pc potenciales formadas por complejo de GlcNAc mediante la incubación de la proteína CBD marcada con SNAP seguida de la detección del anticuerpo anti-SNAP (Ab). Las concentraciones de las preparaciones de proteína Pc total fueron las siguientes: carril 1 , 100 μg; carril 2 , 50 μg; carril 3 , 25 μg. 2) Las preparaciones de lisado de Pc total se trataron con tampón de reacción de quitinasa solo o con 1 U de quitinasa de Streptomyces griseus durante 2 horas a 37ºC antes del análisis.
Los procedimientos en el suplemento incluyen: detección por inmunofluorescencia de la reactividad de GlcNAc en Pc , análisis Western de Pc GlcNAc complejado con proteínas; verificación de genes biosintéticos de GlcNAc en los genomas de Pc y Pneumocystis jirovecii.


Tomado de: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5359649/

sábado, 10 de noviembre de 2018

PRUEBA DE PCR PARA DIAGNOSTICAR NEUMONÍA POR PNEUMOCYSTIS JIRUVECII A PARTIR DE MUESTRA DE LAVADO BRONCOALVEOLAR





TEMA: Pneumocytosis y PCR cuantitativa

OBJETIVO: Estandarizar un método cuantitativo que permita comparar carga de pneumocystis jirovecii en muestras no invasivas y muestras de tejido pulmonar de pacientes colonizados.

MUESTRA: BAL

TIPO DE ÁCIDO NUCLEICO EXTRAIDO: ADN de P. Jiruvecii

TIPO DE PCR: PCR cuantitativa

GEN: MSG 156 pb


EXTRACION DE ADN:  Se homogenizo el tejido pulmonar, se depuró y se purifico el DNA total en el kit de uso comercial QIAamp DNA mini Kit. El aislamiento del gen blanco se realizo mediante PCR, utilizando los partidores PC MSG Forward y PC MSG Reverse y la enzima pfu DNA polimerasa para amplificar parte de la región altamente conservado del MSG, un fragmento de 156 pb.

SENCIBILIDAD: 38% a 58% pacientes sin VIH
90% en caso de PCP en pacientes infectados por el VIH

ESPECIFICIDAD: 100%  

Tomado de: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/29789160

jueves, 1 de noviembre de 2018

PRUEBA DE TAMIZAJE Y PRUEBA CONFIRMATORIA


PRUEBA DE TAMIZAJE 

La prueba de tamizaje mas idónea para esta enfermedad es la tomografía axial computarizada ya que posee una mayor sensibilidad que la radiografiar de tórax para el diagnostico de la enfermedad.
ante sospecha de neumonía  Pneumocystis jirovecii y radiografías simples normales se puede realizar una tomografía de alta  resoluciones de tórax. La imagen típica muestra aumento de la atenuación con opacidad en vidrio despulido con afección bilateral que puede estar acompañada de múltiples lesiones quísticas o neumatoceles.







PRUEBA CONFIRMATORIA

La reacción en cadena de la polimeraza PCR, es una técnica sumamente sensible y especifica. El gen mtLSU rRNA es uno de los mas utilizados cmo blanco para fines de diagnostico, de epidemiología molecular y de seguimiento de la terapia aplicada a los pacientes, recientemente la utilización de la PCR en tiempo real de muestras clínicas y tejidos facilita la obtención de un resultado en menos de tres horas, reduce la probabilidad de contaminación en la muestra y el método permite cuantificar la carga del patógeno lo que favorece la identificación del estado de infección en el paciente. 

Tomado de: