TERAPIA GÉNICA

STEM CELL

LAS CÉLULAS MADRE MESENQUIMALES AUMENTA LA PRODUCCIÓN DE ESPECIES DE REACTIVO DE OXÍGENO DEPENDIENTE DE NOX2 Y LA DESTRUCCIÓN BACTERIANA EN MACRÓFAGOS DURANTE LA SEPSIS.

Se estudió la respuesta fenotípica y funcional de los macrófagos humanos derivados de monocitos a la exposición MSC in vitro. Se ha informado que las células madre / estromales mesenquimales humanas (MSCs) producen un fenotipo de tipo M2, activado alternativamente en los macrófagos. Además, las MSC median el aclaramiento bacteriano efectivo en modelos de sepsis preclínica. Por lo tanto, las MSC tienen una respuesta antimicrobiana y antiinflamatoria. Las MSC indujeron dos fenotipos distintos: los macrófagos tipo M2 ( morfología generalmente alargada, CD163+, acidificación aguda del fagosoma, baja expresión de NOX2 y producción limitada de superóxido fagosomal) y macrófagos tipo M1 caracterizados por altos niveles de producción de superóxido fagosómico. También se observó una producción mejorada de especies reactivas de oxígeno fagosómico en los macrófagos alveolares de un modelo de roedor de sepsis inducida por neumonía. Las MSC potenciaron la fagocitosis de macrófagos humanos de las bacterias no opsonizadas y la eliminación bacteriana mejorada en comparación con los macrófagos no tratados, además las MSC también mejoraron la fagocitosis y la polarización de los macrófagos tipo M1 derivados de pacientes con sepsis grave. 

Tomado de: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/29519920

RATONES DE TIPO SALVAJE (WT), SP-D KNOCKOUT (KO) Y TRANSGÉNICOS SP-D HUMANIZADOS (HTG, EXPRESIÓN SP-D ESPECÍFICA DE PULMÓN) PARA ESTUDIAR EL PAPEL ESPECÍFICO DEL ÓRGANO DE SP-D EN NEUMONÍA.

 La proteína surfactante D (SP-D) expresada en pulmón y riñón desempeña funciones importantes en la inmunidad innata. El estudio actual utiliza ratones de tipo salvaje (WT), SP-D knockout (KO) y transgénicos SP-D humanizados (hTG, expresión SP-D específica de pulmón) para estudiar el papel específico del órgano de SP-D en neumonía PCP.

Después de la infección, los ratones KO mostraron mayores puntuaciones perjudiciales en  pulmones como en los riñones,  y una función renal disminuida que los ratones WT y hTG. Los ratones hTG mostraron una lesión pulmonar comparable pero una lesión renal más grave en comparación con los ratones WT. El aumento de la apoptosis tubular renal, la activación de NF-κB y las citocinas proinflamatorias en el riñón de ratones KO se encontraron en comparación con los ratones WT y hTG. En conjunto, SP-D atenúa la injuria renal aguda en la sepsis mediante la modulación de la apoptosis renal, la inflamación y la señalización de NF-κB.

VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LOS TRNSGENICOS:

Ventajas:

1. Se generan especies mas resistentes y mejoradas.
2. Ayuda a simular enfermedades para generar vacunas.
3. Funcionan como fabricas biológicas.
4. Por su modificaciones genéticas aumentan la producción y disminuyen costos.
5. Obtener órganos para trasplantes humanos .

Desventajas:

1. Generar resistencia a los antibióticos.
2. Provocaría esterilización de semillas.
3. Por una exagerada manipulación los alimentos podrían tornarse tóxicos.
4. Los alimentos podrían generar alergias en seres humanos por la manipulación variada de sus genes.  
5. Bioterrorismo 

Tomado de:
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6193952/

ADN RECOMBINANTE

El ADN se recombina de forma natural mediante diversos procesos como reproducción sexual, transformación bacteriana e infección viral. En el caso de la hequilobacter pylori la tranformación le garantiza captar ADN libre que puede ser parte del cromosoma de otra bacteria e incluso de otra infección bacteriana; tambien hay transformación cuando captura diminutas moléculas de ADN  plasmídico el mismo que le otorga a la bacteria vivir en ecosistemas nuevos; los ejemplos mas claros son las bacterias poseedoras de plasmidos resistentes a los antibióticos.

VACUNA QUE INDUCE INMUNOGENICIDAD Y PROTECCIÓN CONTRA PCP

Se ha realizado una Vacuna peptídica KEX1 recombinante en un modelo de primate.

La inmunización con KEX1 indujo una fuerte respuesta humoral  que permaneció en niveles protectores a pesar del virus de la inmunodeficiencia simia crónica / inmunosupresión inducida por VIH. Los macacos inmunizados con KEX1 se protegieron de la neumonía por Pneumocystis, en comparación con los animales inmunizados de manera simulada, después de la inmunosupresión y la posterior exposición natural en el aire a Pneumocystis.

Estos datos respaldan el concepto de que la estimulación de la memoria inmunológica preexistente a Pneumocystis con una vacuna KEX1 recombinante antes de la inmunosupresión induce respuestas de memoria duraderas y protección en el contexto de una inmunosupresión crónica y compleja 

Tomado de: 

https://www.news-medical.net/life-sciences/Recombinant-DNA-Applications-(Spanish).aspx

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4837913/

WESTERN BLOT

El análisis Western de complejos unidos a GlcNAc de Pc confirma la reactividad de GlcNAc en extractos de Pneumocystis . 1) Las preparaciones de pared celular de Pc se separaron por PAGE, y se analizaron las proteínas Pc potenciales formadas por complejo de GlcNAc mediante la incubación de la proteína CBD marcada con SNAP seguida de la detección del anticuerpo anti-SNAP (Ab). Las concentraciones de las preparaciones de proteína Pc total fueron las siguientes: carril 1 , 100 μg; carril 2 , 50 μg; carril 3 , 25 μg. 2) Las preparaciones de lisado de Pc total se trataron con tampón de reacción de quitinasa solo o con 1 U de quitinasa de Streptomyces griseus durante 2 horas a 37ºC antes del análisis.

Los procedimientos en el suplemento incluyen: detección por inmunofluorescencia de la reactividad de GlcNAc en Pc , análisis Western de Pc GlcNAc complejado con proteínas; verificación de genes biosintéticos de GlcNAc en los genomas de Pc y Pneumocystis jirovecii.

Tomado de: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5359649/

PRUEBA DE PCR PARA DIAGNOSTICAR NEUMONÍA POR PNEUMOCYSTIS JIRUVECII A PARTIR DE MUESTRA DE LAVADO BRONCOALVEOLAR

TEMA: Pneumocytosis y PCR cuantitativa

OBJETIVO: Estandarizar un método cuantitativo que permita comparar carga de pneumocystis jirovecii en muestras no invasivas y muestras de tejido pulmonar de pacientes colonizados.

MUESTRA: BAL

TIPO DE ÁCIDO NUCLEICO EXTRAIDO: ADN de P. Jiruvecii

TIPO DE PCR: PCR cuantitativa

GEN: MSG 156 pb

EXTRACION DE ADN:  Se homogenizo el tejido pulmonar, se depuró y se purifico el DNA total en el kit de uso comercial QIAamp DNA mini Kit. El aislamiento del gen blanco se realizo mediante PCR, utilizando los partidores PC MSG Forward y PC MSG Reverse y la enzima pfu DNA polimerasa para amplificar parte de la región altamente conservado del MSG, un fragmento de 156 pb.

SENCIBILIDAD: 38% a 58% pacientes sin VIH

90% en caso de PCP en pacientes infectados por el VIH

ESPECIFICIDAD: 100%  

Tomado de: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/29789160

PRUEBA DE TAMIZAJE Y PRUEBA CONFIRMATORIA

PRUEBA DE TAMIZAJE 

La prueba de tamizaje mas idónea para esta enfermedad es la tomografía axial computarizada ya que posee una mayor sensibilidad que la radiografiar de tórax para el diagnostico de la enfermedad.

ante sospecha de neumonía  Pneumocystis jirovecii y radiografías simples normales se puede realizar una tomografía de alta  resoluciones de tórax. La imagen típica muestra aumento de la atenuación con opacidad en vidrio despulido con afección bilateral que puede estar acompañada de múltiples lesiones quísticas o neumatoceles.

PRUEBA CONFIRMATORIA

La reacción en cadena de la polimeraza PCR, es una técnica sumamente sensible y especifica. El gen mtLSU rRNA es uno de los mas utilizados cmo blanco para fines de diagnostico, de epidemiología molecular y de seguimiento de la terapia aplicada a los pacientes, recientemente la utilización de la PCR en tiempo real de muestras clínicas y tejidos facilita la obtención de un resultado en menos de tres horas, reduce la probabilidad de contaminación en la muestra y el método permite cuantificar la carga del patógeno lo que favorece la identificación del estado de infección en el paciente. 

Tomado de: 

http://www.medigraphic.com/pdfs/medintmex/mim-2015/mim153l.pdf

http://www.newmicrobiologica.org/PUB/allegati_pdf/2015/1/75.pdf